想要精确将RAW2647细胞诱导为促炎的M1“战士”或抗炎的M2“修复者”？您无需再寻找了！这份详细的RAW2647细胞M1/M2极化方案，将试剂配比和操作细节一并提供，让您轻松实现目标！

细胞来源

使用RAW2647小鼠单核巨噬细胞系。注意：传代次数建议保持在<10代，不宜过多，以保证细胞状态。

培养基及试剂

• 培养基：高糖DMEM
• 血清：推荐使用10%胎牛血清(FBS)
• 抗生素：青霉素-链霉素双抗溶液(1%)
• 关键诱导剂：LPS、IFN-γ、IL-4、IL-13等
• 溶剂对照：使用PBS或细胞培养基

注意：所有细胞因子和LPS请分装储存于-20℃或-80℃，以防止冻融反复！使用前务必在冰上或4℃缓慢溶解，并用预冷的培养基或PBS稀释至工作浓度。

细胞接种

将细胞以2~3×10⁵ cells/孔的密度接种于6孔板中，每孔加入2 mL完全培养基。注意：细胞密度过低可能影响极化状态，过高则可能导致接触抑制或自发分化。

洗涤和更换极化培养基

小心地吸弃孔内的旧培养基（可选步骤）：加入1-2 mL预热的PBS轻轻洗涤细胞，以去除残余血清及代谢废物。

M1组极化

每孔加入2 mL含100 ng/mL的LPS和20 ng/mL的IFN-γ的完全培养基。

M2组极化

每孔加入2 mL含20 ng/mL的IL-4和20 ng/mL的IL-13（可选）的完全培养基。

对照组

对照组1-未处理：只加2 mL新鲜完全培养基。对照组2-溶剂对照：加入含有诱导剂等量溶剂的完全培养基（以排除溶剂本身的影响）。

培养条件

在37℃、5% CO₂条件下继续培养，24小时是常用且显著有效的时间点。根据实验目的，可调整观察时间为6、12、48或72小时，但需进行预实验验证。

极化表型验证

诱导后24小时，可以通过以下几种方式验证极化效果：

• Western Blot/ELISA（蛋白提取）：加入适量预冷的RIPA裂解液（含蛋白酶/磷酸酶抑制剂），在冰上裂解并收集裂解液，检测iNOS、Arg1、CD206等关键蛋白的表达水平。
• ELISA： 检测上清液中TNF-α、IL-6（M1），CCL17、CCL22（M2a）等细胞因子的分泌水平。
• 流式细胞术： 用不含EDTA的胰酶轻柔消化细胞，洗涤后重悬于适量缓冲液中进行染色，检查M1表面标志物CD86、MHC-II与M2表面标志物CD206、CD163的表达变化。
• 免疫荧光： 在孔板内进行固定、通透和染色操作，观察细胞形态变化。

注意：通常需要结合至少两种方法（如qPCR+流式细胞术）来综合判断极化是否成功且特异。

实验资源

Z6·尊龙凯时提供科研级的IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-13等细胞因子产品，具有高活性和低内毒素，助力体外巨噬细胞的培养。

• Recombinant Mouse IFN-γ (C746)
• Recombinant Mouse IL-4 (CK15)
• Recombinant Mouse IL-10 (C697)
• Recombinant Mouse IL-13 (CH18)

上述细胞因子的有效性经实验验证，具有良好的增殖抑制效果，适合在生物医疗研究中广泛应用。尽情利用这些资源，推动您的科研进展！