Z6·尊龙凯时推出的本产品是一款基于探针法荧光定量PCR原理研发的检测试剂盒，具有以下显著特点：

产品特点

1. 即开即用：用户仅需提供样品DNA模板，无需其他繁琐步骤。
2. 高灵敏度：引物和其他组分经过优化，确保检测的高灵敏度。
3. 便于识别假阴性：附带阳性对照，有助于有效区分假阴性结果。
4. 高特异性：引物设计基于中间普雷沃菌的高度保守DNA序列，避免与其他生物DNA发生交叉反应。
5. 灵活应用：本产品支持定性与定量检测，对于定量检测，线性范围至少达到5个数量级。
6. 高性价比：本试剂盒足够支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7. 限于科研：本产品仅限于科研使用。

使用方法

一、DNA提取

利用选用的方法提取和纯化样品DNA。本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、标准曲线稀释

在标准曲线样品的稀释过程中，请在独立区域内操作，以避免样品或本试剂盒其他成分的污染。
1. 标记6个离心管，编号为7，6，5，4，3，2。
2. 向每个管中加入45μL DEPC-H2O（建议使用带芯枪头）。
3. 在7号管中加入5μL浓度为1×10⁸拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得到1×10⁷拷贝/μL的标准曲线样品，保留在冰上待用。
4. 更换枪头，向6号管中加入5μL之前稀释的阳性对照，再次震荡1分钟，得到1×10⁶拷贝/μL标准曲线样品，放冰上待用。
5. 按照相同操作方式继续稀释，直到获得所有6个稀释度的标准曲线样品。
如不需要制作标准曲线，只需将阳性对照稀释至1×10⁵拷贝/μL即可。

三、试剂配制

针对待检样品数量N，准备N+2个qPCR管（N个样品+1个阴性对照+6个阳性对照）。向每个PCR管中加入相应成分（详细步骤请参考说明书，可向我们索取）并转移至样本准备区。

四、添加模板

向每个qPCR管中分别加入2μL的模板，顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品、同时添加婴儿利什曼虫qPCR阳性对照。离心30秒后，立即进行扩增反应。

五、扩增反应

将PCR管放置在PCR扩增仪器的样品槽中进行扩增，具体扩增程序参见详细说明书。

六、结果分析

1. 若制作标准曲线，则以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线，根据待测样品的Ct值推算出样品DNA浓度的log值及其浓度。
2. 如果未制作标准曲线，可依据以下标准判断结果：阳性对照：Ct值<30，表现出明显的指数增长并呈现典型的S型曲线；阴性对照：Ct值38或无Ct值，无明显指数增长期和平台期；样本检测：Ct值<35，指示样本中检测到婴儿利什曼虫，结果为阳性；若Ct值在35-38范围内，应对样本进行复检。
如果复检结果仍然在35-38范围并有明显指数增长，则判定为阳性；否则为阴性。

运输及保存

本产品需低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需单独放置，以避免污染其他试剂。

选择Z6·尊龙凯时的检测试剂盒，助您在生物医疗领域高效、准确地进行科研实验。